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    DB51T 1185-2011 桑蚕微粒子病诊断技术规程

    • 资源ID:20034       资源大小:78.50KB        全文页数:5页
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    DB51T 1185-2011 桑蚕微粒子病诊断技术规程

    7 1四 川 省 地 方 标 准1/T 11852011桑蚕微粒子病诊断技术规程2011 - 01011 - 03 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 11852011言本标准按照 出的规则起草。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局发布。本标准起草单位四川省蚕业管理总站、四川省农业科学院生物技术核技术研究所。本标准主要起草人吴 钢、蔡平钟、朱洪顺、谢忠良、张学清、马露芸。 118520111桑蚕微粒子病诊断技术规程1 范围本标准规定了四川省桑蚕微粒子病诊断技术要求。本标准适用于四川省桑蚕微粒子病的诊断。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。6682 分析实验室用水规格和试验方法20395 桑蚕微粒子病病原鉴定方法844 桑蚕微粒子病防治技术规程3 盐酸[w30%]。氧化钾溶液[w2%] 。氧化氢溶液[wH 210%]。析用水按 6682 规定执行。4 仪器、通光学显微镜、相衬(相差)显微镜,放大倍数 1540 倍或 1640 倍;生化培养箱(温控范围 10 ℃~50 ℃)、冰箱;天平(感量0.1 g)、离心机。心管、无纺布滤纸;载玻片、盖玻片、测微尺;容量瓶、量筒、烧杯、二重皿;乳钵、乳棒;解剖剪、镊子、橡皮吸管;样品袋、冻存管(1.8 5 观观察通过肉眼观察,蚕的不同发育阶段是否具有下列症状a 小蚕期收蚁后不疏毛、体色深暗、体躯瘦小、发育缓慢、重症死亡;群体发育不齐。 118520112b 大蚕期表皮缩皱、体呈锈色;体壁出现微细不规则黑褐色病斑,以尾角末端、气门周围和胸腹足外侧部位较多;蜕皮困难,严重死亡;群体发育不齐。c 蛹蛾期蛹表皮无光泽、反应迟钝、腹部松弛,体壁出现微细不规则黑褐色病斑,感病严重的不化蛾、死亡;蛾羽化展翅不良、鳞毛脱落、腹部膨大、节间松弛,交配能力差,产卵少。d 卵期卵形不正,排列不齐、多重叠卵,卵产附差、易脱落,不受精卵和死卵多;催青期发育不整齐。剖观察将外观观察的具有上述大蚕期典型病症的病蚕,用解剖剪从背中线剪开,肉眼观察丝腺是否有乳白色脓疱状斑块。定通过外观观察,蚕的不同发育阶段出现 述症状之一的,可疑似为蚕微粒子病;通过解剖观察,大蚕期病蚕丝腺出现可见的乳白色脓疱状斑块时,可确诊为蚕微粒子病。品采集采集 述的典型症状蚕、蛹、蛾、卵。采集的样品置于样品袋或冻存管中,做好记载。样品保存采集的样品每份混合均匀后再分成 2 份,其中 1 份作为检样按照 备检验,另 1 份作为备样,保存于 0 ℃~4 ℃冰箱中,保存期 30 d~60 d。不同发育时期的样品,按照下列方法制样a 蚁蚕样品置生化培养箱于温度 29 ℃、相对湿度≥85 条件下,放置 2 d~3 d。b 小蚕期、大蚕期、蛹期、蛾期样品置生化培养箱于温度 29 ℃~32 ℃、相对湿度≥85%条件下,放置 2 d~ 5 d;大蚕期、蛹期经高温处置的样品,可用解剖剪沿背中线剪开,摘取其中肠,每 1 头~5 头蚕或 1 粒~2 粒蛹的中肠为 1 个样。c 卵期样品解除滞育后,在生化培养箱温度 29 ℃、相对湿度≥85%的条件下催青;孵化后待其自然死亡。将上述制备的样本每份分别置于 1 个乳钵孔中,每孔各放 1 个乳棒,磨碎;滴入 4 滴~10滴氢氧化钾溶液[w 2%] ,再次研细。按照乳钵序号,将磨碎液用乳棒点样至载玻片,盖上盖玻片,制成镜检样本。直接观察法将镜检样本,置于显微镜(1540 倍或 1640 倍)下观察,每个样本观察不少于 20 个视野,观察 118520113有无微粒子孢子。离心沉淀法将 备的磨碎液,用无纺布滤纸过滤后,将滤液移入离心管中,经 3000 r/心 3 去上清夜,沉淀物振荡制镜检样本,置于显微镜( 1540 倍或 1640 倍)下观察,每个样本观察不少于 20 个视野,观察有无微粒子孢子。溶解法将检出有微粒子孢子的磨碎液吸取 2 滴,分别滴于载玻片两端,自然干燥后在其中 1 点加 1 滴浓盐酸[ w30%],另 1 点作对照,在 30℃生化培养箱中放置 10 0 ,盖上盖玻片镜检(1540 倍或 1640 倍) 。如果样本已干,可加无菌水 1 滴。经过酸处理的样本,微粒子孢子溶解消失,真菌孢子保持原状。氧化氢法将 检出有微粒子孢子原液吸取 1 滴,滴于载玻片上,再将过氧化氢溶液[wH 210%]1 滴~2 滴滴于孢子液中,盖上盖玻片,经过 10 0 衬(相差)显微镜镜检(1540 倍或 1640 倍) ,活微粒子孢子释放出极丝。定当镜检发现孢子呈长卵圆形,m~mm~m,呈淡绿色,折光性强,中间隐约可见1根黑色线状物,表面光滑,孢子活泼,多左右摆动,有时可见翻滚现象时,孢子则为蚕微粒子孢子(参见20395附录 原样品确诊为蚕微粒子病。加浓盐酸作用后,被溶解的孢子为微粒子孢子,原样品确诊为蚕微粒子病。加过氧化氢作用后,活微粒子孢子释放出极丝,原样品确诊为蚕微粒子病。_________________________________

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